魚神經膠細胞實驗室　Fish Glia Laboratory

〈理學院大樓 605-1 室〉

　　本實驗室以硬骨魚為研究標的，利用細胞培養技術發展細胞株，並以即時定量RT-PCR法、西方墨漬法、細胞免疫染色法和基因轉殖法探討體外培養細胞的基因表現和基因調控。另外，本實驗室也利用所發展出的細胞株進行魚類傳染性病毒的分離和研究，開發魚類病毒檢測法、疫苗和抗病毒飼料添加物。主要的研究方向包括：(1) 硬骨魚中樞神經發育；(2) 硬骨魚肌肉發育；(3) 養殖魚類病毒性疾病檢測及防治。

〈一〉硬骨魚中樞神經發育

A.吳郭魚神經原始細胞株

　　從吳郭魚成體之腦組織建立出持續性細胞株TB2，證實TB2表現多種幹細胞標記和成熟神經細胞之標記〈圖一〉，為第一個公開發表之硬骨魚中樞神經原始細胞的持續性細胞株。首次被揭露在體外培養的硬骨魚細胞表現包括Brain lipid binding protein、 Connexin35 、 Connexin43、 Dopamine decarboxylase、Sox2、Substance P、Tyrosine hydroxylase等基因。

圖一 TB2細胞之GFAP〈褐色〉和S100〈藍色〉蛋白雙重免疫酵素染色。

B.石斑魚伸長細胞樣細胞株

　　從點帶石斑魚幼魚之腦組織建立出持續性細胞株GBC4，證明GBC4細胞類似伸長細胞樣之神經原始細胞。再次確認硬骨魚之中樞神經原始細胞仍保有上皮細胞的特性，在體外培養會表現多種成熟神經細胞如神經元、星狀膠質細胞和寡突膠質細胞的標記，同時也揭露硬骨魚神經原始細胞的多樣性。體外培養的硬骨魚細胞也首次被證實會表現Aromatase B、BMP4和PDGFRα等基因〈圖二〉。

圖二 RT-PCR顯示GBC4細胞之基因表現。

C.紅衫魚寡突膠質原始細胞株

　　從紅衫魚成魚之腦組織建立出持續性細胞株SPB，並證明SPB具有寡突膠質原始細胞和伸長細胞的特性〈圖三〉。首次揭露硬骨魚會表現DARPP-32，並首次證明體外培養的寡突膠質原始細胞會表現Olig2和Noggin2 基因。

圖三 SPB細胞之Olig2〈紅色〉和GFAP〈綠色〉雙重螢光免疫染色，細胞核〈藍色〉以DAPI染色。

〈二〉硬骨魚肌肉發育

　　分別由石斑魚和吳郭魚胚胎建立出體外培養系統，並選殖出可分化出肌肉之細胞株〈圖四〉和自發性收縮之心肌〈影片〉。

圖四 石斑魚有橫紋之肌肉細胞。	自發性收縮之心肌影片

〈三〉養殖魚類病毒性疾病檢測及防治

A.感受性細胞株和病毒分離

　　開發出多種對魚類病毒有高感受性之細胞株，並由養殖之紅魚、金目鱸和鰻魚等分離出神經壞死病毒、虹彩病毒(圖五)和疱疹病毒。

圖五 純化之金目鱸虹彩病毒負染色電子顯微鏡圖。

B.病毒性神經壞死症、巨細胞囊腫病毒症和鰻魚疱疹病毒症檢測法。

倒立顯微鏡 低溫培養箱 抽氣幫浦 無菌操作檯 桌上型高速微量冷凍離心機 磁性攪拌機 水平電泳槽 垂直電泳槽 水浴槽 -20℃ 冷凍櫃 核酸蛋白質轉漬槽 微量電子天平 冰箱 烘箱 試管震盪器 微量離心機 pH meter Shaker Rapid-Cycler Pipette-Aide Pipettors
桌上型高速微量冷凍離心機 〈Refrigerated High Speed Micro-Centrifuge〉	核酸、蛋白質電泳〈PAGE〉及轉漬〈blotting〉系統
實驗室	倒立顯微鏡〈Inverted Microscope〉

溫秋明　Chiu-Ming Wen　教授

辦公室：理學院大樓 605 室　實驗室：理學院大樓 605-1 室

聯絡電話：886-7-5919231，校內分機：7231

E-mail：wenchiumin@nuk.edu.tw